紫外分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室中常用的分析儀器,比例雙光束紫外分光光度計(jì)因其能自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化帶來(lái)的誤差而備受青睞。為了確保其測(cè)量準(zhǔn)確性,定期進(jìn)行校準(zhǔn)是重要的步驟。
一、準(zhǔn)備工作
確保比例雙光束紫外分光光度計(jì)放置在平穩(wěn)的工作臺(tái)上,避免因震動(dòng)或傾斜影響測(cè)量精度。
檢查電源線是否完好,確保電源電壓與儀器額定電壓相符。
根據(jù)需要選擇合適的光譜帶寬和波長(zhǎng)范圍。
二、光源校準(zhǔn)
打開儀器電源,預(yù)熱約20分鐘,使光源穩(wěn)定。
選擇波長(zhǎng)校準(zhǔn)模式,通常儀器會(huì)有專門的校準(zhǔn)波長(zhǎng)。
將標(biāo)準(zhǔn)光源接入儀器,調(diào)整光路,使光束通過(guò)校準(zhǔn)器并進(jìn)入檢測(cè)器。
觀察儀器顯示的吸光度值,并與標(biāo)準(zhǔn)光源的理論值進(jìn)行比較,如有偏差則進(jìn)行調(diào)整,直至達(dá)到校準(zhǔn)要求。
三、波長(zhǎng)校準(zhǔn)
仍在光源穩(wěn)定的狀態(tài)下,選擇波長(zhǎng)掃描模式。
設(shè)置掃描的起始波長(zhǎng)和終止波長(zhǎng),并啟動(dòng)掃描。
觀察掃描圖譜,檢查是否有明顯的峰值或拐點(diǎn),這些可能是波長(zhǎng)不準(zhǔn)確的標(biāo)志。
根據(jù)需要調(diào)整波長(zhǎng)校準(zhǔn)旋鈕,直至圖譜上的峰值或拐點(diǎn)與理論值相符。
四、吸光度校準(zhǔn)
準(zhǔn)備已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于比色皿中,并放入樣品室。
選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng),并測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和測(cè)得的吸光度值,計(jì)算出儀器的吸光度校準(zhǔn)系數(shù)。